南方医科丈修
生物化学实验报告
姓 名: 学 号: 专业年级:
组 另I」:
生物化学与分子生物学实验教学中心
实验名称
实验名称 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳及其定量
实验日期
实验地点
合作者评分教师签名批改日期
合作者
评分
教师签名
批改日期
指导老师
一、 实验目的
.学习醋酸纤维薄膜电泳的基本原理和操作方法；
.了解电泳技术的一般原理；
.掌握电泳分离血清蛋白质及其定性定量的方法。
二、 实验原理
.血清中各种蛋白质的等电点不同，一般都低于。它们在的缓冲液中均解离带负电
荷，在电场中向正极移动。由于血清中各种蛋白质分子大小、形状及所带的电荷量不同， 在醋酸纤维素薄膜上电泳的速度也不同。因此可以将它们分离为清蛋白（ Albumin）、a
1-球蛋白、a 2-球蛋白、B -球蛋白、丫 -球蛋白5条区带。
.血清中不同蛋白质的等电点、分子量及含量
血清蛋白质
等电点
分子量
占总蛋白的％
清蛋白
69,000
57
?72
a 1 —球蛋白
200,000
2
?5
a 2 —球蛋白
300,000
4
?9
B—球蛋白
90,000
?150,000
?12
丫一球蛋白
? 156,000
?950,000 12
?20
缓冲液pH= pl v pHo
血清蛋白带负电荷，在电场中向正极移动
预测血清蛋白电泳区带图
血清蛋白依次分为清蛋白，球蛋白的a 1、a 2、B、丫五个区带
.①膜条经过氨基黑10B染色后显出清晰色带；②各色带蛋白质含量与染料结合量 基本成正比；③可将各色带剪开，分别溶于碱性溶液中；④用分光光度法计算各种蛋白 质的百分数。
三、材料与方法：
.实验材料：
实验试剂：①样品：健康人血清（新鲜、无溶血）；②巴比妥 -巴比妥钠缓冲液（，
离子强度L）;③氨基黑10B染色液；④漂洗液；⑤洗脱液：NaOH溶液。
实验器材：①V-1100分光光度计（X 1）；②恒温水浴箱（X 1）；③试管（X 6）、 试管架（X 1）；④1000卩L加样枪（X 1）、加样枪架（X 1）；⑤醋酸纤维薄膜（2cm*8cm 厚度120卩m）:⑥培养皿（X 5）;⑦点样器或载玻片（X 1）；⑧平头镊子（X 2）； ⑨剪刀（X 1）；⑩电泳槽（X 1）； ?直流稳压电泳仪（X 1）
.实验步骤 1 ?准备与点样：①取2X 8cm的膜条；②亚光面距一端处取一点样线；③充分浸透
在巴比妥缓冲液中；④取出膜条，用滤纸吸去多余的缓冲液；⑤点样器下端粘上薄层血 清；⑥垂直点样。
点样示意图:
注意：点样线尽量点得细窄而均匀。8cm小组标记1—点样线m
注意：点样线尽量点得细窄而均匀。
8cm
小组标记
1
—点样线m
\ 点样区
（粗面）
1
样品标记
2cm
四、结果与讨论:
图一染色后的膜条
.结果分析
本次实验得到的图谱只能够清晰的看出清蛋白和Y—球蛋白的区带，其余无法区
别。原因可能如下：
醋酸纤维薄膜质量不足
薄膜过湿，样品扩散迅速，导致样品分离不成区带
点样太少，区带显色不明显。
电泳时间不足。
薄膜在缓冲液中浸泡的时间不足。
取出电泳后的薄膜过程中曾不慎将薄膜掉到地上。
染色时，因为现场混乱，可能导致醋酸纤维薄膜不是一张一张放入染色液的，在染色 固定前，薄膜与薄膜之间重叠，造成薄膜上还未固定的血清蛋白彼此粘连。
.课后思考题
电泳时，点样端置于电场的正极还是负极？为什么？
答：点样端置于电场的负极。因为人体血清的蛋白质会因电槽中溶质呈碱性而带负
电，要成功分离出各类各类蛋白质，理应将点样端置于电场的负极。
电泳后各区带应明显分开，如分离不清或不整齐，试分析其可能存在的原因。
答：①醋酸纤维薄膜质量不足；②薄膜过湿，样品扩散迅速，导致样品分离不成区带；
③点样太少，区带显色不明显；④染色时，醋酸纤维薄膜不是一张一张放入染色液的， 在染色固定前，薄膜与薄膜之间重叠，造成薄膜上还未固定的血清蛋白彼此粘连。⑤电 泳时电压，电流或电泳过小或时间不够，造成区带未分离。
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